Examinando por Autor "Valdivieso-Quintero, Wilfredo"

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    Cambios en el perfil proteico de E. coli O157:H7 frente al tratamiento con Ib-M1 e IONP@Ib-M1
    (Universidad Nacional de Colombia, 2021-03-25) Ramirez-Forero, Gloria Smith; Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Ropero-Vega, José Luis; Zafra, German; Florez-Castillo, Johanna Marcela; Cibas
    Escherichia coli O157:H7 es una bacteria patógena responsable de enfermedades transmitidas por alimentos y reconocida por su capacidad de resistencia a diversos antibióticos; razón por la cual, se generan complicaciones en el tratamiento de infecciones producidas por esta bacteria. El péptido Ib-M1 libre e inmovilizado en nanopartículas magnéticas de óxido de hierro (IONP@Ib-M1) ha surgido como una nueva alternativa antimicrobiana contra E. coli O157:H7 y aislados clínicos de esta bacteria. El mecanismo de acción de Ib-M1 e IONP@Ib-M1 contra E. coli O157:H7 aún es desconocido; por lo tanto, el objetivo de esta investigación fue la identificación del cambio en el perfil de proteínas de E. coli O157:H7 luego del tratamiento con Ib-M1 e IONP@Ib-M1 como primer paso para determinar su mecanismo de acción. Para esto, se llevó a cabo la obtención de proteínas, posteriormente se llevó a cabo una electroforesis bidimensional para finalmente realizar la determinación de la variabilidad de los perfiles proteicos. Una vez obtenidos los perfiles proteicos se llevó a cabo un análisis de varianza (ANOVA). Los resultados muestran la identificación de proteínas expresadas diferencialmente y las cuales se encuentra involucradas en procesos de quimiotaxis, síntesis y mantenimiento de proteínas, procesos redox, crecimiento celular, transporte de aminoácidos e inhibición de traducción.
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    Desarrollo de un biosensor electroquímico basado en aptámeros para la detección del PSA y su isoforma p2PSA
    (Universidad de Antioquia, 2021-04-05) Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Ropero-Vega, Jose Luis; Cibas
    La cuantificación del PSA ha permitido la reducción de la mortalidad por CP entre un 20 y 30% solo en el continente americano. Sin embargo, existen escena-rios clínicos en donde este biomarcador no permite la distinción entre estados patológicos o fisiológicos. En consecuencia, se han desarrollado estudios encami-nados a aumentar la capacidad diagnóstica y pronós-tica de este biomarcador desde dos frentes: el estudio de la biología y fisiología del PSA y el desarrollo de sistemas de detección portables. Se ha estudiado un amplio espectro de isoformas del PSA siendo una de las más promisorias el p2PSA, que permite mejorar la predicción de desarrollar CP. Por su parte, el estudio de sistemas portables ha llevado a la articulación de sistemas de reconocimiento más estables (como los aptámeros), con dispositivos basados en electrodos que ofrecen una gran diversidad de configuraciones. Aunque se cuenta con múltiples estudios publicados a la fecha, se pueden identificar los siguientes escena-rios de mejora:El diseño de aptameros no ha sido enfocado en el re-conocimiento de isoformas del PSA, son diseñados para reconocer PSA recombinante o no han sido reta-dos con muestras de suero para identificar reacciones inespecíficas.El sistema compuesto por el electrodo de trabajo, electrodo de referencia y contra electrodo no están articulados en un único dispositivo lo que puede difi-cultar su adaptación a sistemas portables.Aunque existe una amplia variedad de combinacio-nes de nano materiales y potenciadores de señal para establecer el sistema transductor muchos de estos sis-temas resultan complejos, de alto costo o difícilmente extrapolables a un dispositivo portable.
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    Estudio de los Niveles de Expresión de Genes Asociados a Lipasas Extracelulares en Cultivos de Candida palmioleophila Suplementados con Aceite de Oliva Como Única Fuente de Carbono
    (2022-06-06) Farelo-Traslaviña, Laura Cristina; Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Hernandez-Peñaranda, Indira Paola
    El interés en la producción biotecnológica de las lipasas radica en sus diversas aplicaciones en la síntesis de ésteres, hidrólisis de grasas para la fabricación de detergentes, producción de biocombustibles, entre otras (Burkert, et al. 2004, Aceves,2012). Se conoce que la levadura Candida palmioleophila tiene capacidad para asimilar derivados de la refinación de aceite de palma (Agualimpia, et al. 2016), y aunque se han descrito perfiles de proteínas extracelulares relacionados con esta actividad, no se conocen los genes específicos involucrados en este proceso. La evaluación de la expresión de genes asociados a lipasas extracelulares en C. palmioleophila puede contribuir con la identificación de la intervención de los genes asociados en los procesos de degradación metabólica de lípidos por técnicas como RT-qPCR. Para ello, se requiere del diseño de oligonucleótidos que permitan la amplificación de genes utilizados como normalizadores y genes candidatos a lipasas. El presente trabajo muestra el diseño y evaluación de 13 parejas de oligonucleótidos para genes reportados como lipasas y para genes reportados como normalizadores y el estudio de expresión de los genes lipasa en C. palmioleophila frente a condiciones inductoras de la actividad lipasa. Para este fin se diseñaron 4 parejas de oligonucleótidos específicos para cada gen y se evaluó su amplificación a partir de ADN genómico (ADNg) y ADN complementario (ADNc). Para realizar una aproximación a la estabilidad de la expresión de los genes de interés se utilizó el algoritmo GNORM. Se observó mayor expresión de la secuencia identificada como LipIII cuando la levadura fue expuesta a medios de cultivo con aceite de oliva como fuente de carbono. Los resultados obtenidos favorecen el estudio de la expresión génica en el entendimiento de la maquinaria metabólica que utiliza C. palmioleophila en la utilización de lípidos y abre la puerta para su uso en la evaluación de otras rutas metabólicas de interés.
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    Evaluación de la Actividad Hidrolítica de un Extracto Enzimático de Candida palmioleophila Libre e Inmovilizado en Nanopartículas de Óxido de Hierro
    (2022-09-14) Morantes-Porras, Maria Katherine; Florez-Castillo, Johanna Marcela; Ropero-Vega, Jose Luis; Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Gomez-Jaimes, Franci Nathali; Escorcia-Cabrera, Andres Mauricio
    Candida palmioleophila es una levadura lipolítica anteriormente conocida como Torulopsis candida, la cual se ha reportado por su capacidad de asimilar aceite de palma crudo y se ha encontrado en sus perfiles proteicos presencia de enzimas lipolíticas de un tamaño de 63kDa y 28kDa (Cáceres Villamizar, 2019). Las lipasas son proteínas presentes en los animales, en las plantas y en los microorganismos (Pedroza Padilla et al., 2017). La función principal de las lipasas es la hidrólisis de triacilgliceroles que produce ácidos grasos y glicerol; además, estas enzimas catalizan reacciones in vitro, tales como esterificación, transesterificación e interesterificación en medios hidrofóbicos (Fernández Jerí et al., 2013). Estas ventajas las ha impulsado dentro del grupo de enzimas con mayor producción en el campo de aplicaciones biotecnológicas. Sin embargo, aunque se tienen evidencias de la posible producción de enzimas lipolíticas por C. palmioleophila, no existen revisiones sobre la actividad hidrolítica de extractos enzimáticos de esta levadura, permitiendo de esta forma identificar otros procesos industriales en los cuales pueda ser utilizado este microorganismo. Una estrategia empleada para la optimización de la estabilidad y la actividad de las enzimas con el fin de ser usadas en procesos industriales, es la inmovilización, este es un proceso en el cual se busca confinar a la enzima en una región definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad catalítica y que permitan su reúso (D. M. Arroyo, 1998). Por lo anterior, en este trabajo se estudiaron las características bioquímicas de extractos enzimáticos de C. palmioleophila libres e inmovilizados en nanopartículas de óxido de hierro. Se evaluaron diferentes medios de cultivo suplementados con fuentes de carbono basadas en ácidos grasos, de estos se seleccionó el medio MBS2 /Ácido oleico (1%) por ser el que favoreció la mayor cantidad de proteína en los extractos enzimáticos obtenidos y posteriormente se evaluó la actividad enzimática de los mismos extractos por medio de la degradación de sustratos hidrosolubles como el p-nitrofenil acetato, obteniendo la mayor actividad para el mismo medio con un valor de 0,19 μmol min-1. Adicionalmente, se realizó la inmovilización de los extractos enzimáticos haciendo uso de la metodología de unión a soporte en nanopartículas magnéticas de Fe3O4 (NpM), logrando un porcentaje de inmovilización de 89,14%. Se observó, que el proceso de inmovilización en NpM le confiere una mayor estabilidad de pH y temperatura a los extractos inmovilizados en comparación con los extractos libres. De esta manera, la enzima libre mostró mayor actividad con un pH óptimo de 9 (0,040 μmol/min-1) y una temperatura de 30°C (0,081 μmol/min-1), mientras que con el extracto inmovilizado los valores de actividad aumentaron en unas condiciones óptimas de pH 9 (0,149 μmol/min-1) y 50°C (0,102 μmol/min-1).
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    Evaluación de la Matriz de Alginato de Sodio y Maltodextrina Para la Encapsulación de Lactobacillus Casei
    (2022-07-28) Carrisales-Caycedo, Maria Fernanda; Osorio-Marquez, Jorge Daniel; Jaramillo-Gutierrez, Maria Ines; Valdivieso-Quintero, Wilfredo
    Lactobacillus Casei identificado como una bacteria con efectos benéficos a la salud humana debido a que contribuyen al equilibrio de la microbiota intestinal y potencian el sistema inmunológico previniendo trastornos intestinales y ha sido reconocida como bacteria probiótica principalmente en matrices líquidas. Se ha reportado cómo es su proceso de liberación y sus características en diversos procesos de encapsulación, pero no se encuentra literatura acerca de su supervivencia por un periodo de tiempo mayor a 8 días. Siendo necesario conocer como afecta el sistema de encapsulación al microorganismo en un periodo de tiempo mayor y saber su distribución en la cápsula. El objetivo del presente trabajo fue identificar la distribución, viabilidad y liberación del microorganismo encapsulado en alginato y maltodextrina mediante el método por goteo en tres concentraciones con el fin de conocer sus propiedades mediante ensayos en placas de Petri para observar la distribución celular en las cápsulas obtenidas y simulación de supervivencia en jugos gástricos simulados a lo largo de 21 días. Se obtuvo cápsulas rígidas y con características físicas adecuadas en las tres concentraciones donde sin diferencias aparentes en cuanto forma, textura o color, posteriormente fueron sometidas a pruebas de interacción obteniendo un fenómeno de dosis dependiente donde a mayor concentración inicial, mayor presencia de microorganismo en la matriz superficial de las cápsulas corroborado con los resultados obtenidos mediando las micrografías mediante el microscópio electrónico de barrido (SEM) y el crecimiento alrededor de las cápsulas por medio de su siembra directa. Los resultados obtenidos en la prueba de vialidad se corroboraron por medio de la sobrevivencia a jugos gástricos simulados logrando concluir que el microorganismo encapsulado está usando la maltodextrina como fuente de energía dentro de la matriz, logrando establecer un tiempo de vida útil de 21 días permitiendo su aplicación en futuros productos alimenticios.
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    Verificación de las Características Analíticas de Biosensores PEPTIR Para la Detección y Cuantificación de Escherichia Coli O157:H7 en Aguas Naturales
    (2022-07-21) Lozano-Cadena, Jhon Jairo; Ropero-Vega, Jose Luis; Valdivieso-Quintero, Wilfredo
    Escherichia coli es un microorganismo patógeno de importancia a nivel de salud púbica. Actividades humanas como manejo indiscriminado de desechos, entre otros, ha conllevado a generar contaminación de afluentes hídricos. El consumo del agua sin tratamiento previo ha llevado a que se generen enfermedades al ser humano. Por esta razón es importante el uso de técnicas que permitan la detección de Escherichia coli O157:H7 como la técnica de filtración por membrana y técnicas moleculares muy sensibles. Sin embargo, estas técnicas presentan desventajas. Por esta razón surge la necesidad de optar por sistemas más rápidos, fácil manejo y bajo costo. Para el presente trabajo se utilizó un biosensor electroquímico basado en péptidos PEPTIR 2.0 diseñado por el grupo CIBAS de la universidad de Santander, con capacidad de reconocer a Escherichia coli O157:H7 y se realizó la verificación con evidencia significativa para comprobar que este sistema si cumple con el objetivo por el cual fue diseñado por medio de técnicas electroquímicas. Para esta verificación se evaluaron características analíticas como Limites de detección y cuantificación, repetibilidad y selectividad, además esta respuesta electroquímica del biosensor fue comparada con una técnica validada como filtración por membrana. Se determinó que límites de detección y cuantificación fueron 20 y 66 UFC/mL, respectivamente, mostrando rango lineal entre las concentraciones 10, 30 y 50 UFC/mL. Además, se obtuvo buena repetibilidad. El comportamiento de este biosensor en términos de selectividad presento una inclinación marcada hacía Escherichia coli O157:H7 en presencia de microorganismos interferentes. La respuesta del biosensores fue comparada con la técnica de filtración por membrana, mostrando una buena correlación entre las dos, lo que resulta ser un método muy prometedor y permite concluir que es mucho más rápido, más fácil de manejar y su potencial uso lo convierten en una gran alternativa para ser integrados en la industria.