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Title: Caracterización de nuevas proteínas Cry11 obtenidas por modelos heurísticos computacionales
Authors: Suárez Barrera, Miguel Orlando
Abaunza Villamizar, Sebastián Mauricio
Issue Date: 23-Nov-2018
Publisher: Bucaramanga : Universidad de Santander, 2018
Abstract: Bacillus thuringiensis (Bt) es una bacteria Gram positiva con cuerpos de inclusión parasporales, también denominadas δ-endotoxinas, dentro de estas se encuentra la proteína Cry que se conoce por su actividad tóxica frente a múltiples órdenes de insectos y nematodos, dentro de estos A. aegypti principal vector de múltiples enfermedades importantes en la salud pública como Dengue, Zika Chikungunya, entre otros. Cry11 ha sido reconocida por su alta especificidad frente a A. aegypti. Sin embargo, la aparición de resistencias por parte de los insectos que son objeto de estudio, han dado como resultado la aplicación de diversas estrategias, para el mejoramiento de proteínas entre ellas se describe mutagénesis sitio dirigida y DNA shuffling. El uso de herramientas biocomputacionales han ampliado el espectro en el desarrollo de moléculas con mayor potencial, no obstante, estas estrategias no han sido descritas en el desarrollo de mutantes potenciadas de Cry. Este trabajo se basa en el uso del software HIDDEN 1.0 donde a partir de Cry11Aa se obtuvieron librerías de variantes in silico, se seleccionaron las variantes Heu2, Heu3 y Heu4, y se realizó su validación in vitro, para lograrlo se sintetizaron, clonaron en PSV2 y se expresaron en (E.coli) DE3BL21 y BMB171 (B. thuringiensis), se analizó sus perfiles electroforéticos en SDS page y se evaluó su toxicidad mediante ensayos gruesos con A. aegypti, paralelamente se llevó a cabo un análisis estructural con matriz de MatGat, Bioedit y comparaciones estructurales contrastadas con la literatura. Se encontró que las variantes presentaron un porcentaje superior al 97% de identidad con Cry11Aa, los cambios en su mayoría pertenecieron al dominio II, y sus porcentajes de letalidad fueron menor al 5%, lo que sugiere que los cambios aminoacídicos en las regiones importantes de los tres dominios, están involucradas en la toxicidad que presenta la proteína.
Description: 91 p.
URI: https://repositorio.udes.edu.co/handle/001/4341
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