Evaluación de la Actividad de Extractos Enzimáticos de Candida palmioleophila en la Conversión del Ácido Oleico
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Resumen en español
Las enzimas han surgido como una alternativa prometedora en la catálisis de las reacciones químicas, dado que, a nivel biotecnológico, acarrean ahorro en los costos de producción, mejoran la productividad, la calidad de productos intermedios y son seguras para el medio ambiente. Dentro de ellas, se encuentran las lipasas, enzimas encargadas de catalizar in vivo la hidrólisis de triacilglicéridos, e in vitro la hidrólisis o síntesis de ésteres y la resolución de mezclas racémicas con una selectividad alta, teniendo como sustratos principales ácidos grasos como el ácido oleico. Estas enzimas son potencialmente producidas por microorganismos, donde sobresalen las levaduras del género Candida. En el presente estudio se evaluó la actividad de conversión del ácido oleico en presencia de etanol, usando extractos enzimáticos de la levadura Candida palmioleophila de referencia Nakase & Itoh DBVPG 8040, en la que han sido identificados genes lipolíticos de los cuales se está estudiando su potencial hidrolítico y enantioselectivo. Se llevó a cabo la estandarización de las condiciones óptimas para dicha reacción, empleando lipasa comercial de Candida rugosa, mediante un montaje de reflujo, con seguimiento por titulación de ácidos grasos y con fluorescencia de rodamina. Se obtuvieron los extractos enzimáticos de C. palmioleophila, se concentraron, y caracterizaron por electroforesis SDS Page, y se evaluó su capacidad de convertir el ácido oleico disuelto en etanol a 40°C en las condiciones estandarizadas. El perfil electroforético obtenido sugirió la presencia de posibles lipasas, por las bandas reportadas con pesos moleculares entre 35 kDa y 72 kDa, lo cual respalda la actividad de conversión de los extractos. Los extractos enzimáticos presentaron una actividad de 2,768 U/mg sobre el sustrato, a una concentración de 0,16 mg/mL, en relación ácido oleico:etanol de 1:4.5, llegando a consumir 9,824 * 10 3 μMoles tras 210 minutos de actividad.
Resumen en ingles
Enzymes have emerged as a promising alternative in the catalysis of chemical reactions, since, at the biotechnological level, they bring savings in production costs, improve productivity, the quality of intermediate products and are safe for the environment. Among them are lipases, enzymes responsible for catalyzing the hydrolysis of triacylglycerides in vivo, and in vitro the hydrolysis or synthesis of esters and the resolution of racemic mixtures with high selectivity, having as main substrates fatty acids such as oleic acid. These enzymes are potentially produced by microorganisms, where the yeasts of the genus Candida stand out. In the present study, the conversion activity of oleic acid in the presence of ethanol was evaluated, using enzymatic extracts of the reference yeast Candida palmioleophila Nakase & Itoh DBVPG 8040, in which lipolytic genes of which their potential is being studied have been identified. hydrolytic and enantioselective. The standardization of the optimal conditions for said reaction was carried out, using commercial lipase from Candida rugosa, by means of a reflux assembly, with monitoring by fatty acid titration and with rhodamine fluorescence. Enzyme extracts of C. palmioleophila were obtained, concentrated, and characterized by SDS Page electrophoresis, and their ability to convert dissolved oleic acid into ethanol at 40 ° C under standardized conditions was evaluated. The obtained electrophoretic profile suggested the presence of possible lipases, due to the bands reported with molecular weights between 35 kDa and 72 kDa, which supports the conversion activity of the extracts. The enzymatic extracts presented an activity of 2,768 U / mg on the substrate, at a concentration of 0.16 mg / mL, in a ratio of oleic acid: ethanol of 1: 4.5, reaching a consumption of 9.824 * 10 3 μMol after 210 minutes of activity .