Examinando por Materia "Candida palmioleophila"
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- PublicaciónAcceso abiertoDifferential protein profiles of the lipolytic yeast candida palmioleophila under different growth conditions(2018-05-01) Rincón, Leidy Johanna; Agualimpia Valderrama, Bayron-Enrique; Zafra, GermanThis work aimed to stablish the influence of different carbon and nitrogen sources, including vegetable oils, on the variability of the protein profiles of an oil and grease-degrading strain of Candida palmioleophila. Production of biomass and protein by C. palmioleophila strain SACL11 was evaluated under eight different culture conditions, which provided palm oil or sunflower oil as sole carbon source and ammonium sulfate as sole nitrogen source, during 48 h at 30 °C. Protein profiles from C. palmioleophila crude extracts were obtained by SDS-PAGE every 12 h and analyzed with bioinformatic programs. The results showed that treatments providing the highest concentrations of each of the carbon and nitrogen sources resulted in a higher biomass production, with sunflower oil being the carbon source that produced the highest values and an overall faster growth. Proteins of approximately 63 KDa and 28 KDa were detected only in protein extracts obtained from media containing palm or sunflower oil as carbon source, suggesting a key role of these proteins in the hydrolysis of oils. Furthermore, the molecular weights of these proteins were similar to several reported lipases and esterases from Candida rugosa and other related species, reinforcing their possible function. In conclusion, this work identified and reported for the first time differential protein profiles of the lipolytic yeast C. palmioleophila in response to different growth conditions, and found evidence of the involvement of lipase-like proteins during the metabolism of vegetable oils. This give insight about the enzymes involved in grease metabolism and reinforces the potential of this promising microorganism to be used as an excellent bioremediation agent in fat, oil and grease-polluted environments.
- PublicaciónAcceso abiertoEstudio de Secuencias Genéticas Asociadas a Lipasas Extracelulares de Candida Palmioleophila Para su Expresión en Kluyveromyces Lactis(Universidad de Santander, 2022-12-01) Acevedo-Castro, Mayra Alejandra; Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Hernández-Peñaranda, Indira Paola; Rondón-Villarreal, Nydia Paola; Fajardo-López, Mónica; Zafra-Sierra, Germán AlexisLa levadura C. palmioleophila tiene capacidad para degradar grasas y aceites en el tratamiento de efluentes residuales de la refinación del aceite de palma (Agualimpia et al., 2016; Rodríguez et al., 2016). Recientemente se realizó el estudio del genoma de C. palmioleophila (datos no publicados) en el que se identificaron 8 secuencias de ADN que guardaban identidad con lipasas extracelulares de otras especies del género Candida. Teniendo en cuenta la importancia de las lipasas en la industria de alimentos, agrícola, farmacéutica y cosmética, el presente trabajo tuvo como objetivo estudiar secuencias genéticas asociadas a lipasas extracelulares de Candida palmioleophila para su expresión en Kluyveromyces lactis. Para ello, se realizó la caracterización in silico de las secuencias mediante la búsqueda de atributos asociados a lipasas extracelulares tales como la presencia de sitio activo, péptido señal y la comparación de modelos predictivos con estructuras cristalográficas reportadas. Se seleccionó la secuencia de ADN denominada Sec6 que codifica para una proteína de 205 aminoácidos y en cuya secuencia de aminoácidos se encontró péptido señal, el motivo acil hidrolasa y el posible sitio activo de las lipasas, adicionalmente los modelos generados presentaron una identidad del 48.96 % con la lipasa 4 de Candida viswanatti y una similitud estructural con la lipasa A de Candida antarctica con un RSMD de 0.83. La secuencia de ADN fue optimizada para su expresión en K. lactis por medio del vector pKLAC2. El mejor transformante de lipasa recombinante sec6 de Candida palmioleophila codificante de una proteína de 22.5 kDa, produjo 289.46 de proteína parcialmente purificada del cultivo suplementado con galactosa 2% como inductor. Su expresión fue favorecida al aumentar el tiempo de cultivo, pero no la cantidad de inductor. La actividad de la proteína derivada de la secuencia Sec6, mostró actividad de lipasa en medio suplementado con aceite de oliva y actividad enzimática de 17.3 U/mg de proteína en la hidrólisis del p-nitrofenil acetato. Los resultados presentados permitieron evidenciar la expresión heteróloga de la lipasa (Sec6) de Candida palmioleophila y la categorización de las secuencias codificantes para trabajos posteriores dirigidos a la expresión de otras lipasas, el estudio de otros factores que afecten su actividad enzimática y las posibles aplicaciones biotecnológicas de las lipasas recombinantes de Candida palmioleophila.
- PublicaciónAcceso abiertoEvaluación de la Actividad Hidrolítica de un Extracto Enzimático de Candida palmioleophila Libre e Inmovilizado en Nanopartículas de Óxido de Hierro(2022-09-14) Morantes-Porras, Maria Katherine; Florez-Castillo, Johanna Marcela; Ropero-Vega, Jose Luis; Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Gomez-Jaimes, Franci Nathali; Escorcia-Cabrera, Andres MauricioCandida palmioleophila es una levadura lipolítica anteriormente conocida como Torulopsis candida, la cual se ha reportado por su capacidad de asimilar aceite de palma crudo y se ha encontrado en sus perfiles proteicos presencia de enzimas lipolíticas de un tamaño de 63kDa y 28kDa (Cáceres Villamizar, 2019). Las lipasas son proteínas presentes en los animales, en las plantas y en los microorganismos (Pedroza Padilla et al., 2017). La función principal de las lipasas es la hidrólisis de triacilgliceroles que produce ácidos grasos y glicerol; además, estas enzimas catalizan reacciones in vitro, tales como esterificación, transesterificación e interesterificación en medios hidrofóbicos (Fernández Jerí et al., 2013). Estas ventajas las ha impulsado dentro del grupo de enzimas con mayor producción en el campo de aplicaciones biotecnológicas. Sin embargo, aunque se tienen evidencias de la posible producción de enzimas lipolíticas por C. palmioleophila, no existen revisiones sobre la actividad hidrolítica de extractos enzimáticos de esta levadura, permitiendo de esta forma identificar otros procesos industriales en los cuales pueda ser utilizado este microorganismo. Una estrategia empleada para la optimización de la estabilidad y la actividad de las enzimas con el fin de ser usadas en procesos industriales, es la inmovilización, este es un proceso en el cual se busca confinar a la enzima en una región definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad catalítica y que permitan su reúso (D. M. Arroyo, 1998). Por lo anterior, en este trabajo se estudiaron las características bioquímicas de extractos enzimáticos de C. palmioleophila libres e inmovilizados en nanopartículas de óxido de hierro. Se evaluaron diferentes medios de cultivo suplementados con fuentes de carbono basadas en ácidos grasos, de estos se seleccionó el medio MBS2 /Ácido oleico (1%) por ser el que favoreció la mayor cantidad de proteína en los extractos enzimáticos obtenidos y posteriormente se evaluó la actividad enzimática de los mismos extractos por medio de la degradación de sustratos hidrosolubles como el p-nitrofenil acetato, obteniendo la mayor actividad para el mismo medio con un valor de 0,19 μmol min-1. Adicionalmente, se realizó la inmovilización de los extractos enzimáticos haciendo uso de la metodología de unión a soporte en nanopartículas magnéticas de Fe3O4 (NpM), logrando un porcentaje de inmovilización de 89,14%. Se observó, que el proceso de inmovilización en NpM le confiere una mayor estabilidad de pH y temperatura a los extractos inmovilizados en comparación con los extractos libres. De esta manera, la enzima libre mostró mayor actividad con un pH óptimo de 9 (0,040 μmol/min-1) y una temperatura de 30°C (0,081 μmol/min-1), mientras que con el extracto inmovilizado los valores de actividad aumentaron en unas condiciones óptimas de pH 9 (0,149 μmol/min-1) y 50°C (0,102 μmol/min-1).
- PublicaciónAcceso abiertoExpresión diferencial de proteínas secretadas por candida palmioleophila durante la degradación de aceite de palma(Bucaramanga : Universidad de Santander, 2019, 2019-03-13) Cáceres Villamizar. Camila Andrea; Zafra, German; Valdivieso Quintero, WilfredoEl presente estudio tuvo como objetivo determinar la expresión diferencial de enzimas secretadas por una cepa lipolítica de C. palmioleophila durante la degradación del aceite de palma. La caracterización de las proteínas fue realizada en diferentes intervalos de tiempo, por medio de un estudio descriptivo experimental con técnicas moleculares como la electroforesis de proteínas SDS-PAGE y electroforesis en 2D. Se encontró que la mayor expresión de perfiles proteicos tanto intracelulares como extracelulares de la cepa SACL-11 de Candida palmioleophila se presentó a las 48 horas de exposición al aceite de palma. El perfil proteico intracelular estuvo conformado por nueve bandas proteicas diferentes con un rango de peso molecular desde los 18.7 hasta los 216.5 KDa, dentro de las cuales las proteínas extracelulares con pesos moleculares de 52.9 KDa y 45.9 KDa podrían corresponder a lipasas y/o esterasas encargadas del proceso de biotransformación del aceite de palma. Además, una banda de 49.2 KDa presentó similitud con las lipasas LIP4 y LIP8 descritas previamente para Candida albicans. En cuanto a los perfiles bidimensionales, se observó una mayor cantidad de spots para las proteínas extracelulares en comparación con las intracelulares. El estudio demostró que en efecto existen diferencias entre los perfiles proteicos de las enzimas extracelulares secretadas por Candida palmioleophila SACL-11 a través del tiempo, especialmente en la cantidad de bandas/spots expresados, en su peso molecular y punto isoeléctrico durante la degradación del aceite de palma.
- PublicaciónAcceso abiertoMolecular detection and characterization of novel lipase genes of the lipolytic yeast Candida palmioleophila(2018-05-01) Rodríguez Mateus, Zully; Vera Pacheco, Katerine; Zafra, GermanIn this study we analyzed the genetic variability of lipase gene sequences from eight oil and grease-degrading strains of Candida palmioleophila and to relate it to their degrading ability. The genetic variability of lipase genes was analyzed by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and low-stringency single specific primer- PCR (LSSP-PCR), in order to obtain specific DNA fingerprints from each strain, which were subsequently compared by bioinformatic programs. DNA fingerprints were contrasted to the ability of each strain to remove palm oil in liquid culture. The results showed that at least three genes encoding lipases are present in C. palmioleophila, two of them resembling the LIP2 and LIP6 genes of C. albicans. DNA fingerprints obtained by LSSP-PCR revealed differences in the sequences of C. palmioleophila lipase genes, which allowed to group the strains according to their degrading activity. C. palmioleophila strains SACL05, SACL08 and SACL11, which showed the highest removal of palm oil after 72 h (77 to 79 % removal), were grouped in a single clade in dendrograms. Similarly, strains SACL01, SACL03, SACL06 and SACL09, which showed intermediate removal activity of palm oil (54 to 76%) grouped in a different clade. This suggests the genetic variability in lipase genes is directly related to the differences found in the efficiency of degradation of oils. On the other hand, DNA fingerprints obtained by PCR-RFLP did not allow to differentiate the strains and did not generate changes in the bands patterns between the analyzed strains. In conclusion, this study reported for the first time the detection and characterization of lipase genes from the lipolytic yeast Candida palmioleophila, and their association to the degradation of oils.