Examinando por Materia "Quorum sensing"

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    Restringido
    Caracterización de la lactonasa variante Epp 9 derivada del gen aiiA de Bacillus thuringiensis en la inhibición de los autoinductores C4-HSL y 3-oxo-C12-HSL de Pseudomonas aeruginosa
    (Universidad de Santander, 2024-11-28) Pérez-Vergel, Astrid Carolina; Suárez-Barera, Miguel Orlando; Valdivieso-Quintero, Wilfredo; Hernández-Peñaranda, Indira Paola; Laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología
    La resistencia a los antibióticos es uno de los problemas más importantes en que hay en la salud humana la cual ha incrementado los costos médicos, la estancia hospitalaria y la mortalidad (Jiménez, 2020). Por este motivo la inhibición del QS se ha considerado como un enfoque terapéutico atractivo, para prevenir los fenotipos resistentes y virulentos debido a que es más específica e impone una menor presión selectiva hacía el patógeno así disminuyendo la probabilidad de que la bacteria genere resistencia (Espinoza & Esparza., 2021).
  • Publicación
    Acceso abierto
    Enzymatic hydrolysis of molecules associated with bacterial quorum sensing using an acyl homoserine lactonase from a novel Bacillus thuringiensis strain
    (2014-01) Pedroza, Carmen Julia; Florez, Alvaro M.; Ruiz, Orlando S.; Orduz, Sergio
    N-acyl homoserine lactones are key components of quorum sensing, the bacterial communication system. This communication mechanism regulates the expression of genes, including those involved in virulence and biofilm formation. This system can be interrupted by the action of enzymes that hydrolyze the signaling molecules. In this work, we studied the enzymatic properties of a recombinant AHL-lactonase from Bacillus thuringiensis strain 147-11516, using substrates with acyl chains of different length (C4-HSL, C6-HSL, C7-HSL, C8-HSL and C10-HSL), we also investigated the effect of pH (5.0–9.0), temperature (20–70 °C), concentration of monovalent, divalent and trivalent metals ions (0.2 and 2.0 mM) and EDTA. The results showed that the recombinant AHL-lactonase had biological activity in alkaline pH conditions (8.0) and high temperature (47 % of hydrolyzed substrate at 60 °C). The recombinant AHL-lactonase has activity on substrates with different acyl chain length. However, the activity of the recombinant enzyme was decreased in the two concentrations of all metal ions evaluated but was not inhibited by EDTA. The affinity of the enzyme for all substrates tested and its performance, in the evaluated conditions, suggest that the AHL-lactonase from B. thuringiensis strain 147-11516 could be used as a strategy for disruption of the Gram-negative bacteria communication system under normal and challenging conditions.
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    Restringido
    Evaluación del Efecto Inhibitorio de la Comunicación Celular de Pectobacterium Carotovorum Generado por el Aislado Stenotrophomonas Sp-HSL25
    (2021-01-18) Escalante-Valek, Mariana; Rueda Forero, Nohora Juliana; Suarez-Barrera, Miguel Orlando
    Las acíl homoserina acilasas son enzimas que integran la superfamilia de las nucleófilo N-terminal (Ntn) hidrolasas, que intervienen en la degradación de señales inductoras tipo acíl homoserina lactona (AHL), su actividad permite detener la comunicación celular (QS). A través de un proyecto de bioprospección realizado en el año 2009 por el grupo de investigación BioMol, se obtuvo el aislado HSL25, identificado como Stenotrophomonas sp por medio de PCR y secuenciación molecular, donde se encontró el gen que codifica a una proteína tipo acilasa atípica, perteneciente a la familia penicilin acilasa; por esta razón, se planteó como objetivo principal evaluar la actividad inhibitoria de Quórum Sensing de la acilasa HSL-25 frente a Pectobacterium carotovorum en modelos de Solanum tuberosum. Anteriormente, Stenotrophomonas sp - HSL25 demostró aprovechar como fuente nutricional diferentes señales AHL, por ello, se efectuaron ensayos para determinar su actividad acilasa utilizando la cepa biosensor Chromobacterium violaceum (CV026) frente a las señales N-butiril-L- homoserina lactona (C4 -AHL), N-hexanoil-L-homoserina lactona (C6- HSL), N-3-oxohexanoil-L-homoserina lactona (3-oxo-C8-HSL), la N- octanoil-L-homoserina lactona (C8-HSL) y N- dodecil homoserina lactona (C12- AHL) sintéticas; adicionalmente y con el fin de asegurar que la actividad se debe únicamente a la acción de la proteína HSL25, se construyó una cepa recombinante que portara el gen descrito para la acilasa. Las cepas nativa y recombinante mostraron alta actividad en la utilización de las señales con cadena acíl lateral corta (C4 Y C6 AHL), a su vez, la suspensión extracelular de HSL25 produjo un efecto completamente inhibitorio sobre la infección causada por Pectobacterium caratovorum que origina la podredumbre blanda de la papa.
  • Publicación
    Acceso abierto
    Identification, cloning and lactonase activity of recombinant protein of N-acyl homoserine lactonase (AiiA) from Bacillus thuringiensis 147-115-16 strain
    (2014-07) Florez, Alvaro M.; González, Adriana; Pedroza, Carmen Julia; Correa, Elizabeth; Rueda Forero, Nohora Juliana; Orduz, Sergio
    The quorum-quenching N-acyl homoserine lactonases are a family of bacterial metalloenzymes that participate in degradation of N-acyl homoserine lactones (AHLs), disrupting the quorum sensing system of gram negative bacterial species. From a collection of Bacillus thuringiensis strains isolated in Colombia from plants and exhibiting toxic activity against lepidopteran insects, 310 bacterial isolates were tested to determine lactonase activity by using biosensor systems in presence of synthetic N-hexanoyl-L-homoserine lactone (C6-HSL) and N-octanoyl-L-homoserine lactone (C8-HSL). From them, 251 strains showed degrading activity to both C6-HSL and C8-HSL, 57% exhibited degrading activity to C6-HSL and 43% to C8-HSL. One B. thuringiensis strain, denoted as 147-115-16, that exhibit high degrading activity to C6-HSL and C8-HSL, was able to attenuate soft rot symptoms in infected potato slices with Pectobacterium carotovorum. This strain contains an homologous of the aiiA gene that was cloned, sequenced and expressed in Esherichia coli DE3. The recombinant protein AiiA147-11516 display activity to C6-HSL, C8-HSL, N-(β-ketocaproyl) (3-O-C6-HSL) and N-3-oxo-dodecanoyl (3-O-C12-HSL). The recombinant strain in the presence of P. caratovorum cultures was able to attenuate the infection, suggesting that it interferes either on the accumulation or response to the AHLs signals. Acording to this data and based on previous report from recombinant AiiA147-11516, this enzyme exhibit activity to wide range of catalytic substrates suggesting its industrial application in the disease control programs by plants transformation.