Comparación de la PCR anidada y PCR convencional en el diagnóstico de Plasmodium Vivax y P. Falciparum
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Resumen en ingles
Malaria is diseases caused by Plasmodium sp., and in Colombia approximately 160,000 cases are annually registered, where 75% are produced by P. vivax and 24% for P. falciparum. The molecular diagnosis is performed by Nested PCR, is a general amplification followed by a specific, using two pairs of different primers. This study compared the sensitivity and specificity of nested PCR with the conventional PCR to identify P. vivax and P. falciparum in DNA from blood of patients. As samples were selected 18 patients were identified as positive by blood smear for malaria. At the DNA isolation protocols were used 3: Heidari, Chelex®100 and commercial kit from Promega. In the nested PCR and conventional primers were used to identify P. falciparum and P. vivax. The results of the amplifications obtained with conventional PCR were similar to those obtained with nested PCR, demonstrating that have the same specificity and sensitivity, which allows to conclude that the realization of the conventional PCR is sufficient for the diagnosis of P. vivax and P. falciparum, reducing time and costs in the identification. The PCR is the best method for the diagnosis of Malaria, which is more sensitive and specific compared with rapid testing and microscopic examination of drop thick, allowing the presence of the parasite in the early stages of the disease when the parasite load is minimal, and also gives the possibility of identifying cases of mixed infections.
Resumen en español
La malaria es una enfermedad causada por Plasmodium sp., y en Colombia anualmente se registran aproximadamente 160.000 casos donde el 75% son producidos por P. vivax y 24% por P. falciparum. El diagnóstico molecular se realiza mediante PCR anidada que es una amplificación general seguida de una específica, utilizando dos pares de cebadores diferentes. En este trabajo se comparó la sensibilidad y especificidad de la PCR anidada con la PCR convencional para identificar P. vivax y P. falciparum en ADN de sangre de pacientes. Como muestra se seleccionaron 18 pacientes identificados mediante gota gruesa como positivos para malaria. En el aislamiento del ADN se utilizaron 3 protocolos: Heidari, Chelex® 100 y Kit comercial de Promega. En la PCR anidada y convencional se emplearon cebadores que identifican P. falciparum y P. vivax. El resultado de las amplificaciones obtenidas con la PCR convencional fueron similares a las obtenidas con la PCR anidada, demostrando que poseen la misma especificidad y sensibilidad, lo que permite concluir que la realización de la PCR convencional es suficiente para el diagnóstico de P. vivax y P. falciparum, reduciendo tiempo y costos en la identificación. La PCR es el mejor método para el diagnóstico de Malaria, por ser más sensible y especifico, comparado con la prueba rápida y el examen microscópico de gota gruesa, permitiendo detectar la presencia del parásito en las primeras fases de la enfermedad, cuando su carga parasitaria es mínima, y además otorga la posibilidad de identificar casos de infecciones mixtas.
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1657-320X